Amparo Guillén, desde temprana edad, descubrió un interés por la actuación. A la edad de los 23 años inició su carrera con el grupo Candilejas, donde presentó las obras “Señora Presidenta” y “Las Leandras”.
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Amparo Guillén fue parte del grupo de teatro La Mueca, junto a los actores Oswaldo Segura, Sandra Pareja, los hermanos Héctor y Andrés Garzón, y Richard Barker, con quienes interpretaron varias obras como Maestra Vida, y Mis adorables entenados.

Esta última nació como una obra de teatro en 1988 y llegó a la televisión un año más tarde. Debido a su deceso, en redes sociales se han comenzado a viralizar imágenes de una Amparo al inicio de su carrera.
Dentro de su carrera también formó parte de la serie Aída. Mientras que estuvo presente en la quinta temporada de la telenovela ‘3 Familias’.

En 2019, la actriz formó parte del Movimiento CREO, donde se postuló como candidata a concejal de Guayaquil para las elecciones seccionales de 2019, pero no resultó elegida.